Hong Kong University - Pasteur Research Centre
- Post-Doctoral Fellow
2006 - maintenantPublic health measures have successfully contained outbreaks of the severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV), which infected more than 8000 people and caused 774 deaths worldwide since November 2002, but concerns remain over future recurrences. Therefore continuous efforts have been made to develop safe vaccine strategies against SARS-CoV. Caution has to be taken for the safety of SARS-CoV vaccines due to the possibility of immune system-mediated enhancement of the disease, a fact that has been observed before with vaccines against coronavirus (such as feline infectious peritonitis virus).We have developed a SARS vaccine candidate based on recombinant native full-length Spike-protein trimers (a surface protein of SARS-CoV). Our vaccine protocol elicited an in vivo neutralizing and protective immune response in rodents. By using SARS-CoV pseudotyped virus (SARSpp) we have analysed the capacity of anti-Spike antibodies to mediate antibody-dependent enhancement (ADE) of viral entry in vitro. The experiments exhibited opposite pattern according to cell types: while heat-inactivated sera from immunized animals or convalescent SARS patients still inhibit SARSpp entry in prototypic permissive cell line, these sera induced virus penetration in human B cell lines although they do not express SARS-CoV receptor (i.e. angiotensin-converting enzyme 2; ACE2). Entry into human B cell lines occurred in an FcgRII-dependent and ACE2-independent fashion indicating that ADE of virus entry is a novel cell entry mechanism of SARS-CoV. We are now investigating the biochemical pathways (such as pH-dependency and endosomal/lysosomal proteases involvement) as well as the FcgRII subfamilies required in FcgRII-mediated SARS-CoV entry. Production of different anti-Spike monoclonal antibodies will allow us to characterize SARS-CoV epitopes as well as antibody isotypes involved in ADE phenomenon if any. Finally, we expect to study antibody-dependent enhancement occurrence during wild type SARS-CoV infection of human primary cells.
The Hong Kong University of Science & Technology (HKUST)
- Visiting scholars
2004 - 2006Duchenne muscular dystrophy (DMD) is the most common of all muscular dystrophies in humans, which is characterized by muscle fiber degeneration followed by a progressive muscle wasting, leading ultimately to death. It is caused principally by a deficiency in the membrane cytoskeletal protein dystrophin, which is known to play a key role in the maintenance of the muscle membrane integrity. As well as a long-established in vitro correlation between DMD and abnormal Ca2+ homeostasis in mature muscle cells, it has also been suggested that one of the embryological functions of dystrophin may be in some way related to the regulation of intracellular Ca2+. However, previous studies were performed using isolated muscle fibers, myotubes and myocytes and so the functional relationship between a lack of dystrophin and abnormal Ca2+ homeostasis in both embryological and mature tissue within an intact animal is still unclear. While much of our knowledge of dystrophin function has been derived from studying mice, in recent years the zebrafish has become an amenable system for examining muscle disease at the gene expression, protein and cellular levels, and it offers many advantages over the mouse (such as ex utero development and optical clarity) in modeling the early events of DMD. Using live intact zebrafish embryos, we have gathered preliminary imaging data to suggest that localized Ca2+ signals correlate both temporally and spatially with normal zebrafish muscle development. Thus, our initial goal is to use complementary aequorin-based luminescent Ca2+ imaging (via newly developed apoaequorin expressing transgenic fish) and fluorescent-based confocal Ca2+ imaging to characterize the precise location, timing, nature and reproducibility of Ca2+ transients generated during normal muscle development, and investigate their relationship to dynamic patterns of dystrophin expression. We will explore the developmental significance and function of these Ca2+ transients via their modulation using photolabile Ca2+ buffers and cages. Our second goal is to characterize Ca2+ signaling in our zebrafish model under dystrophic conditions, induced via antisense morpholino oligos, peptide nucleic acids, and short-interfering RNAs, as well as using identified muscle degeneration mutants. The use of intact zebrafish as a vertebrate species to model DMD, combined with state-of-the-art imaging and novel molecular techniques to modulate both intracellular Ca2+ levels and dystrophin gene expression, will allow us to make a significant contribution to understanding the relationship between Ca2+ signaling and dystrophin function during normal muscle development as well as under induced dystrophic conditions.
Centre de Physiopathologie Toulouse-Purpan _ INSERM U563
- Etudiant en DEA puis These
1999 - 2004Le système opioïde endogène est constitué d’une vingtaine de neuropeptides répartis en trois familles : les endorphines, les enképhalines et les dynorphines qui se lient respectivement à trois classes de récepteurs opioïdes : mu, delta et kappa. Outre leurs actions antalgiques, les opioïdes exercent des effets pléiotropiques en périphérie.
Les opioïdes libérés au cours d’un stress, comme l’injection de morphine, conduisent à une augmentation de l’expression du récepteur de mort Fas (CD95) dans les splénocytes, les cellules cardiaques et pulmonaires. L’augmentation de Fas dans les splénocytes se traduit par une sensibilité accrue à l’apoptose. Nous nous sommes demandés quelle pouvait être la contribution des opioïdes dans une pathologie dépendante de l’expression du récepteur Fas. L’utilisation d’un modèle d’hépatite fulminante, induite par l’injection d’un anticorps agoniste de Fas, a permis de montrer que le prétraitement des animaux avec un antagoniste des récepteurs opioïdes, la naltrexone, réduit significativement la létalité des souris. Dans le foie, la réduction de sensibilité à l’apoptose n’est pas due à une modulation de l’expression de l’ARNm codant Fas. La diminution de la sévérité de l’hépatite, chez les animaux traités avec un antagoniste incapable de franchir la barrière hématoencéphalique et l’absence de récepteurs opioïdes sur les hépatocytes, suggère un mécanisme d’action périphérique impliquant d’autres cellules que les hépatocytes. La participation des polynucléaires neutrophiles, impliqués dans de nombreuses lésions hépatiques, a été écartée puisque l’effet délétère des opioïdes persiste chez des animaux déplétés en neutrophiles. L’apoptose des hépatocytes qui peut faire suite à l’engagement de Fas sur des cellules non parenchymateuses telles que les cellules endothéliales ou les cellules de Kupffer, qui expriment des récepteurs opioïdes, permet d’envisager leur implication dans l’effet observé. Cette étude montre l’intérêt que pourrait conférer l’utilisation d’antagonistes des récepteurs opioïdes dans le traitement de pathologies hépatiques.
Des études in vitro ont montré que les opioïdes modulent le chimiotactisme des cellules immunitaires, influencent la prolifération des lymphocytes et peuvent modifier l’expression du récepteur Fas. L’utilisation d’un modèle de souris transgénique pour un récepteur à l’antigène des lymphocytes T anti-ovalbumine (clone DO11.10), nous a permis de montrer que le blocage du système opioïde par injection de naltrexone conduit à un peuplement plus rapide et plus intense des ganglions drainant le site d’immunisation. Cette accélération et intensification de la réponse immunitaire ne sont tributaires ni d’une modulation de l’expression des chimiokines lymphoïdes, ni d’un pouvoir prolifératif accru ou d’une réduction de la sensibilité à l’apoptose des lymphocytes. L’influence des opioïdes, lors du processus inflammatoire et la mise en évidence de l’expression du récepteur delta par les cellules dendritiques matures, nous orientent actuellement vers un effet des opioïdes sur les cellules dendritiques en amont du recrutement des lymphocytes dans les organes lymphoïdes. Cette étude devrait permettre une meilleure compréhension des mécanismes responsables de l’incapacité des sujets, sous traitement opiacé, à élaborer une réponse lymphocytaire efficace.
