-
Unité de Thérapie Cellulaire du CHU Nice
- Ingénieur Hospitalier
2014 - 2015
-
Centre Européen de Recherche en Imagerie Médicale (CERIMED)
- Stagiaire Master 2 Pro
2014 - 2014
Résumé :
Les glioblastomes (GBM) sont des tumeurs angiogéniques du système nerveux central. Les cellules inflammatoires représentent jusqu’à un tiers de la masse tumorale et l’action antitumorale d’agents anti-angiogéniques pourrait s’expliquer par un effet sur les cellules immunitaires associées à la tumeur.
Dans ce contexte, le laboratoire étudie par microscopie bi-photonique multi-couleur intra-vitale la dynamique de recrutement, la distribution et les interactions de ces cellules immunitaires et les événements qui en résultent sur un modèle préclinique de GBM (GL261 DsRed).
Durant mon stage, j’avais comme projet d’améliorer (1) le suivi des interactions entre les cellules tumorales et les cellules immunitaires et (2) la localisation et l’identification des cellules immunitaires.
Dans un premier temps, j’ai établi des protocoles de biologie moléculaire et cellulaire qui ont permis de mettre en place une lignée de cellules GL261 DsRed exprimant la protéine de fusion Histone 2B EGFP. Ce marqueur nucléaire permet une meilleure discrimination des cellules tumorales. La perspective est de greffer ces cellules et d’étudier par microscopie intra-vitale les réponses en terme de prolifération, apoptose et migration des cellules tumorales suite à leurs interactions avec les cellules immunitaires.
Dans un second temps, j’ai établi un protocole d’immunohistochimie (IHC) multi-couleurs avec 3 anticorps (CD11b, CD11c et MHC-II) sur des coupes de cerveaux portant une tumeur GL261 DsRed et les paramètres d’acquisitions en microscopie confocale. Ces IHC multi-couleurs permettent de mieux définir les phénotypes des cellules immunitaires envahissant la tumeur mais également de visualiser leurs répartitions respectives au sein de la tumeur. Les perspectives sont d’augmenter le nombre de marqueurs utilisés afin d’affiner le phénotypage des cellules immunitaires
Mots clés : Glioblastome – Interactions cellulaires - Immunohistochimie multi-couleurs - Microscopie confocale
-
URM E 4320 TIRO-MATOs CEA-UNS-CAL
- Stagiaire Master 2 Recherche
2013 - 2013
Résumé :
Le stress oxydatif est un déséquilibre résultant d’une production accrue des espèces réactives de l’oxygène et de l’azote (EROs & ERAs) et/ou d’une baisse du pouvoir antioxydant des cellules. Le stress oxydatif intervient dans l’induction et dans la progression de diverses pathologies et tout particulièrement des maladies neuro-dégénératives.
La protéine SLC5A8 est exprimée dans la membrane des axones. Selon les hypothèses du laboratoire, SLC5A8 permettrait de contrôler l’entrée de lactate dans les axones afin de réguler le niveau du stress oxydatif lié au métabolisme. Dans un modèle de souris invalidées pour SLC5A8, une forte neuro-dégénérescence de la substance blanche a été mise en évidence.
Afin d’étudier le rôle physiologique du SLC5A8 dans le cerveau et son implication potentielle dans la neuro-dégénérescence, des analyses métabolomiques et protéomiques ont été réalisées chez des souris invalidées et sauvages.
Mon travail a consisté à étudier les variations liées à l’invalidation de SLC5A8 de différents métabolites et molécules associées au stress oxydatif.
Une augmentation des quantités de Glucose-6-Phosphate et de la forme oxydée du GSH (GSSG) ainsi qu’une diminution de la quantité de NADPH ont notamment été détectées dans les souris invalidées.
De plus, une augmentation de l’expression de la Glyoxalase 1 (Glo1) impliquée dans la détoxification du MéthylGlyoxal (MG), précurseur du stress carbonyle a été mise en évidence. Enfin, une augmentation d’Espèces Réactives de l’Azote (ERAs) a été observée.
L’ensemble de ces résultats corrobore l’hypothèse du laboratoire selon laquelle SLC5A8 aurait un rôle clé dans le contrôle du stress oxydatif lié au métabolisme des axones.
Mots clés : SLC5A8 - Métabolisme du Cerveau - Espèces Réactives - Stress - Glyoxalase 1 - Neurodégénérescence
-
INSERM U898
- Stagiaire Master 1 Recherche
2012 - 2012
Résumé :
Les gliomes sont des tumeurs malignes du système nerveux central dont le glioblastome (GBM) correspond à la tumeur de plus haut grade. Ces tumeurs présentent de mauvais pronostic du fait de l’apparition de récidives systématiques à l’arrêt du traitement (radiothérapie et Témodal®).
Les récidives seraient dues à la persistance de cellules souches cancéreuses résistantes aux traitements, capables d’auto-renouvellement et ayant le pouvoir de se différencier et donc de redonner une tumeur. Dans ce contexte, le ciblage des cellules souches de glioblastome (CSG) apparaît comme une stratégie intéressante.
Grâce à une collaboration avec l’Institut de Chimie des Substances Naturelles de Gif-Sur-Yvette, nous avons obtenu deux banques de criblage.
J’ai criblé les 4560 composés purs de la chimiothèque grâce au test de viabilité cellulaire au XTT. Quatre molécules se sont révélées prometteuses car présentant un pourcentage de cytotoxicité de 100% à 5µg/ml et supérieure à 20% à 0,1µg/ml et cela sur 2 lignées de CSG (TG1 & TG6).
Des criblages préalables de 1600 extraits de l’extractothèque ont permis de sélectionner l’extrait d’écorce d’un arbre d’Ouganda dont le composé actif majoritaire a été identifié comme étant la convallatoxine. In vitro, j’ai montré que cette molécule est 20 000 fois plus cytotoxique que le Témodal® sur la lignée TG1 ainsi que sur la lignée de GBM U87-MG et qu’il y a synergie en combinant ces 2 drogues. Cependant, in vivo, la convallatoxine n’a pas présenté d’effet anti-tumoral.
Néanmoins, l’identification d’une molécule éradiquant définitivement les CSG reste un défi majeur.
Mots clés : Glioblastome - Cellules Souches Cancéreuses - Criblage
