Paris2004 - 2005Actuellement en stage au centre de neurochimie CNRS IFR 37 de Strasbourg, mon travail est réparti entre deux unités.
La première se déroule au centre commun de microscopie électronique de l'IFR. Le travail consiste à préparer des cervelets de souris mutantes par leurs inclusions dans une résine d'araldite. D'effectuer des coupes semi-fines et ultra-fines sur ces derniers et de les observer au microscope électronique pour une étude ultrastructurale. Cela me permet également de me familiariser avec le fonctionnement d'un service commun et les différentes techniques qui y sont pratiquées.
La seconde se déroule dans l'unité de neurotransmission et sécrétion neuroendocrine sous la direction du Docteur Yannick BAILLY. Dans cette équipe, mon travail concerne l'analyse structurale des neurones centraux chez la souris.
Cette étude se fait par inclusion des cervelets dans la paraffine, la coupe de ces derniers, leur coloration et leur observation. A l'issue de ces travaux, je serai formé aux protocoles d'immunihistochimie et à l'utilisation d'un microscope confocale et à fluorescence Certains de ces résultats ont été utilisés pour un Poster présenté dans le cadre du congrès NEUREX d'avril 2005. Ces travaux font l'objet d'une clause de confidentialité.
Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire de Strasbourg
- Stagiaire
2003 - 2003Un stage au laboratoire de microscopie électronique de l’IGBMC (Institut de Génétique et Biologie Cellulaire et Moléculaire) de Strasbourg supervisé par le Docteur Patrick SCHULTZ m’a permis d’utiliser la technique de microscopie électronique de coloration négative, de me familiariser avec la technique de cryomicroscopie et de me perfectionner dans l’utilisation du microscope électronique à transmission. La finalité de ce stage était la reconstruction tridimensionnelle d’un mutant de TF II D grâce aux traitements d’images. Cette expérience m'a permis de me familiariser avec le systéme UNIX, nécessaire au fonctionnement des plates-formes d'imagerie.
Sanofi-Synthélabo
- Stagiaire
Paris2003 - 2003Le stage au laboratoire de recherche de Sanofi-Synthelabo de Strasbourg sous la direction du Docteur David COWLEY et du Docteur Axel GANZHON a complété mes connaissances dans les domaines de la spectroscopie, des techniques de fluorescence et l'utilisation de laser( Dynamic Light Scattering). Le projet principal consistait à mettre au point un protocole de screening en polarisation de fluorescence pour une kinase et à déterminer entre deux agents de détection, lequel était le plus adapté à ce screening.
La méthode utilisée pour la détermination de l’activité de l’enzyme a été la polarisation de fluorescence. La liaison d’un agent de détection à un substrat couplé à un fluorophore (dans notre cas la fluorescéine) permet de modifier ses caractéristiques fluorescentes selon sa taille. Ainsi le rapport entre l’émission de fluorescence polarisée verticalement et horizontalement est différent selon la taille de la molécule sur laquelle l’agent de détection se fixe (dans notre cas substrat phosphorylé ou non). Cette caractéristique permet de connaître l’activité des kinases.
Le protocole de screening mis au point pour la méthode de polarisation de fluorescence a été testé sur plusieurs centaines de produits. La comparaison entre les deux agents a elle aussi été analysée et l’agent numéro 1 s’est révélé le plus efficace mais son prix élevé ne rendra pas son utilisation systématique dans tous les screenings. Ces résultats ont aussi permis de comparer la méthode de polarisation de fluorescence par rapport à une autre technique de screening. J’ai été formé à la méthode de DLS (Dynamic Light Scattering) pour compléter les expériences de screening.
Laboratoire de cristallographie des matériaux minéraux et biologiques de Nancy.
- Stagiaire
2002 - 2002Un stage dans le domaine de la cristallographie au LCM3B de l’université Henri Poincaré de Nancy (Laboratoire de Cristallographie des Minéraux et des Matériaux Biologiques CNRS UMR : 7036) encadré par le Docteur Catherine CORBIER m’a fait travailler en collaboration avec des biologistes structuralistes et permis de connaître les bases de la cristallographie et de la représentation tridimensionnelle. Mon travail consistait à trouver des conditions de cristallisation de plusieurs enzymes, mais aussi de trouver des sites de fixation des ions calciums grâce à une plate-forme d'imagerie.
Laboratoire d’Ingénierie Moléculaire et Biochimie Pharmacologique de Metz.
- Stagiaire
2001 - 2001Le premier stage effectué à l’université de Metz sous la conduite du Docteur Eric BATTAGLIA m’a fait acquérir les bases de la recherche documentaire scientifique, de savoir tenir un cahier de laboratoire, d’appliquer également les techniques de base d’enzymologie et de biologie moléculaire et cellulaire, éléments qui ont été précieux tout au long de mes différents stages. La détermination des constantes de cinétique enzymatique, la technique de PCR, de culture cellulaire en Batch, de Western Blot … m’ont été enseignés lors de ce stage, dont l’objectif était l’expression et la purification de quatre variants alléliques de la Glutathion S-Transférase Pi humaine.
La première étape consistait à insérer un gêne d'un variant de la GST Pi dans un plasmide. Puis à créer un plasmide avec le géne d’expression inversé (Témoins). Ensuite de transfecter des bactéries avec ces plasmides. Une culture avec une induction de l’expression des GST Pi a été réalisée. Les GST Pi ont été purifées juqu’à atteindre un taux d’activité très important et une contamination protéique faible. Cette purification a été précisée par le calcul de nombreuses activités ainsi que par des séparations sur gel en condition dénaturante et des immunoblots en condition dénaturante. De plus, un protocole d’optimisation de l’expression des GST de la classe Pi de la lignée cellulaire DH5α et HMS 174 a été mis au point lors du stage, qui pourra permettre une expression ultérieure des GST. Ces activités vont permettre les différentes expériences visant à caractériser l’interaction du ketoproféne et de ses métabolites principaux sur les GSTP.
