2007 - 2009Chez Bacillus subtilis, la sporulation constitue un modèle simple de différentiation morphologique impliquant l’expression séquentielle d’une centaine de gènes après carence nutritionnelle. Deux chromosomes identiques sont distribués par une septation asymétrique dans deux compartiments inégaux. A la suite d'un mécanisme d'endocytose, le plus petit compartiment devient une organelle, la préspore, au sein du plus grand, la cellule-mère. La préspore acquiert par étapes successives des capacités de résistance aux conditions externes, puis est relâchée dans le milieu sous forme libre. L’enchainement des différents programmes d’expression géniques est orchestré par l’activation séquentielle et compartimentalisée de quatre facteurs sigma de transcription, spécifiques à la sporulation. Ces voies d’activation reposent sur la transduction de signaux entre la cellule-mère et la préspore.
Mon travail porte sur la voie d’activation de sigmaG dans la préspore. A cette étape, la préspore est endocytée au sein de la cellule mère et enveloppée par deux membranes qui délimitent un espace intermembranaire.
L’opéron spoIIIA est exprimé dans la cellule mère et code pour huit protéines nécessaires à l’activation de sigmaG. Nos travaux suggèrent que certaines de ces protéines s’assemblent en un complexe qui présente certaines caractéristiques des systèmes de sécrétion. Premièrement, l’analyse des séquences primaires et des prédictions de structures secondaires des protéines SpoIIIA met en évidence des similarités avec des composants des systèmes de sécrétion de type II et IV des bactéries à Gram négatif. Ces prédictions sont appuyées par nos expériences qui suggèrent que SpoIIIAA aurait une activité ATPase nécessaire à l’activation de sigmaG. Des expériences génétiques et biochimiques nous ont également permis de montrer que l’une de ces protéines, bien que produite dans la cellule mère, réside partiellement et fonctionne dans la membrane interne de la spore. Enfin, nous avons démontré qu’au moins cinq des protéines SpoIIIA forment un complexe membranaire. L’ensemble de ces résultats suggèrent que ce complexe serait ancré dans les deux membranes qui entourent la préspore. Ce complexe pourrait être impliqué dans la sécrétion d’une molécule signalisatrice nécessaire à l’activation de sigmaG.
European Molecular Biology Laboratory - EMBL Grenoble Oustation
- Post-doc
2004 - 2007L'objectif de mon projet etait de realiser une etude structurale des proteines humaines Slit et Robo, qui sont impliquees dans divers processus de migration cellulaire, incluant la guidance des neurones au cours du developpement.
L'expression de ces proteines en systeme bacterien et en baculovirus ayant echoue, j'ai mis au point un systeme d'expression mammifere dans le laboratoire, ce qui m'a permis de produire ces proteines sous forme soluble dans des cellules HEK. Apres purification, j'ai entrepris la cristallogenese de differents fragments des proteines Slit et Robo et je suis parvenue a resoudre la structure des domaines LRR (Leucine-Rich Repeats) de Slit2, des deux premiers domaines Ig de Robo et du complexe forme par le premier domaine Ig de Robo et le deuxieme domaine LRR de Slit2. L'ensemble des resultats structuraux ont permis d'etablir les bases moleculaires de l'interaction entre les proteines Slit et Robo.
Institut de Biologie Structurale J.P. Ebel
- Doctorante
2000 - 2003L'objectif de ma thèse était de réaliser une étude de la synthèse de la paroi de Streptococcus pneumoniae, paroi qui participe à la croissance et la division bactérienne et fait intervenir les « Penicillin-Binding Proteins » (PBPs). J'ai étudié la localisation du répertoire complet des six PBPs au cours du cycle cellulaire de S. pneumoniae, ce qui a révélé des similitudes inattendues entre les mécanismes de division des bactéries de type bacille et coque. L’attribution du rôle spécifique de chaque PBP a mis en valeur la contribution de PBP3, une D,D-carboxypeptidase, dans la régulation de la division bactérienne. J'ai par ailleurs déterminé la structure tridimensionnelle de PBP3 à 2.8 Å de résolution, de qui m'a permis de contraindre les modèles de synthèse de la paroi chez le pneumocoque.
